抗性基因即抗性的遺傳因子,是選擇基因的一種。目前由于大量抗生素在人類醫藥業、畜牧養殖業濫用,導致了人體或動物體內抗生素抗性基因(ARGs)的產生,不可避免的導致耐藥微生物和抗性基因的增加和擴散,引起一系列污染和生態風險。作為21世紀一類新興污染物,抗性基因的污染水平已經遠遠超過我們的預想。因此對人體、土壤等樣本中抗性基因的分布水平、擴散傳播及消減技術的研究,刻不容緩。微基生物可以提供抗性基因的定量檢測服務。
檢測樣本
糞便、水樣、土壤、霧霾、細菌等
若客戶提供DNA,建議客戶記錄抽提DNA時樣本的使用重量或是體積,方便后繼對數據進行轉化。
檢測平臺
qPCR定量檢測平臺,能夠檢測300多種抗生素抗性基因。
檢測服務
絕對定量檢測服務:
是測定目的基因在樣本中的分子數目,通過構建標準曲線對未知模板進行分子數目的定量,即通常所說的拷貝數。
相對定量檢測:
測定目的基因在樣本中的含量的相對比例,而不需要知道它們在每個樣本中的絕對拷貝數,一般是通過CT值之差來計算。
檢測方法
(1)SYBRGreen法
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后構象發生變化,能夠吸收497nm的激發光并發出520nm的熒光;而不摻入DNA雙鏈中的染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。
(2)TaqMan探針法
擴增時加入一個特異性的寡核苷酸熒光探針,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5′-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。